微球菌核酸酶凭借其高效、特异性强的特点,已成为生物技术领域不可或缺的工具酶。
在分子生物学和生物技术领域,大肠杆菌DNA聚合酶I(E. coli DNA Polymerase I)是一种极为重要的工具酶,以其多功能性和高效性在DNA合成、修复和克隆等实验中发挥着关键作用。这种酶不仅在基础研究中不可或缺,还在生物技术应用中展现出广泛的潜力。 大肠杆菌DNA聚合酶I的特性 大肠杆菌DNA聚合酶I是一种多功能酶,具有三种主要活性:5'→3'聚合酶活性、3'→5'外切酶活性和5'→3'外切酶活性。5'→3'聚合酶活性使其能够以单链DNA为模板,合成互补的DNA链,从而实现DNA的修复和合成。3'→5'外切酶活性则用于校正错误的核苷酸,确保DNA合成的准确性。5'→3'外切酶活性则能够去除DNA末端的核苷酸,帮助修复DNA损伤和制备平末端。 广泛的应用 大肠杆菌DNA聚合酶I在分子生物学研究中具有广泛的应用。例如,在DNA克隆实验中,它被用于平末端连接,通过填补DNA片段的凹端或去除末端的多余核苷酸,制备适合连接的平末端。在DNA测序中,DNA聚合酶I能够合成标记的DNA片段,用于后续的序列分析。
溴酚蓝和二甲苯青FF作为指示剂,分别指示电泳的进程,帮助实验者判断电泳是否达到最佳分离效果。
尿素聚丙烯酰胺凝胶配置试剂盒(Urea-PAGE Preparation Kit for RNA)是一种专为RNA电泳设计的试剂盒,能够高效、便捷地配制尿素聚丙烯酰胺凝胶(Urea-PAGE),广泛应用于RNA的变性电泳分析。 试剂盒组成 该试剂盒提供了配制Urea-PAGE凝胶所需的所有试剂,包括: 30% Acr-Bis(29:1):用于制备聚丙烯酰胺凝胶。 5× TBE缓冲液(RNase free):用于凝胶制备和电泳。 尿素:用于变性RNA。 凝胶聚合催化剂:加速凝胶聚合。 TEMED:用于催化凝胶聚合。 DEPC水:用于配制溶液。 优势 高效便捷:试剂盒提供了所有必需试剂,用户只需自备制胶器具,即可快速完成凝胶配制。 无RNase污染:所有组分均经过DEPC处理,确保RNA的完整性。 适用范围广:不仅可用于RNA的变性电泳,还可用于非变性电泳(Native PAGE)。 高分辨率:适用于小RNA(如miRNA、siRNA)的高分辨率电泳。 使用方法 根据RNA片段的大小选择合适的凝胶浓度,按照试剂盒提供的表格配制Urea-PAGE凝胶。
它具有与 EB 相当的灵敏度,能够检测到低浓度的核酸分子,同时避免了 EB 的高毒性和潜在致癌性。
λ DNA HindIII + EcoRI是一种常用的DNA分子量标准,广泛应用于琼脂糖凝胶电泳中,用于估算DNA片段的大小。它是通过将λ噬菌体DNA用HindIII和EcoRI两种限制性内切酶完全酶切后获得的,具有明确的片段大小分布。产品特性片段组成:λ DNA HindIII + EcoRI Marker由13条双链DNA条带组成,片段大小范围从125 bp到21,226 bp。即用型设计:已预混1×上样缓冲液,可直接用于凝胶电泳。稳定性:室温保存一个月带型无变化,但建议低温保存以防止核酸酶污染。使用方法电泳条件:凝胶浓度:建议使用0.5%-1.0%的琼脂糖凝胶。电泳缓冲液:1×TAE或0.5-1×TBE。电压:6-8 V/cm,电泳时间30-60分钟。热处理:使用前建议在65℃水浴中加热5分钟,然后在冰浴中冷却3分钟,以避免COS位点的片段结合。上样量:根据加样孔宽度,取2-5 µL加入凝胶加样孔中。染色与观察:电泳结束后,使用溴化乙锭(EB)或其他DNA染料染色,在紫外灯下观察条带。
DL200DNAMarker是一种即用型的分子量标准由重组质粒经酶切获,包含多个特定长度的双链DNA
在生物体的分子世界中,核糖核酸酶H(RNase H)是一种具有独特功能的酶,它专门识别并切割DNA-RNA杂交体中的RNA链,因此被誉为DNA-RNA杂交体的“拆解专家”。 RNase H广泛存在于生物体内,从细菌到人类细胞中都有其身影。它是一种内切酶,能够特异性地识别DNA-RNA杂交双链中的RNA部分,并在RNA链上切割磷酸二酯键。这种酶的活性对于维持细胞内的核酸代谢平衡至关重要。在细胞的DNA复制和修复过程中,RNase H发挥着不可或缺的作用。例如,在DNA复制过程中,RNA引物被合成以启动DNA链的合成,而RNase H则负责移除这些RNA引物,以便DNA聚合酶能够继续合成DNA链,从而确保DNA复制的顺利进行。 此外,RNase H在转录偶联修复(TCR)过程中也扮演着重要角色。当DNA损伤发生在正在转录的基因中时,RNA聚合酶可能会停滞在损伤位点。此时,RNase H能够移除RNA聚合酶前方的RNA-DNA杂交体,从而为DNA修复酶提供空间,促进损伤的修复。这一过程对于维持基因组的稳定性和细胞的正常功能至关重要。 在分子生物学研究中,RNase H也被广泛应用于各种实验。
它在细胞中发挥着重要的生理功能,尤其是在基因沉默和RNA干扰(RNAi)过程中。
Cas9 NLS(SpCas9-NLS)是一种经过改造的CRISPR/Cas9系统蛋白,来源于化脓性链球菌(Streptococcus pyogenes)。它通过在Cas9蛋白的N端或C端添加核定位信号(NLS),能够高效地进入细胞核,从而提高基因编辑的效率。 功能与特点 SpCas9-NLS保留了野生型Cas9的高效基因编辑能力,同时通过NLS的引导,能够快速进入细胞核,减少在细胞质中的滞留时间,从而显著提高基因编辑的成功率。此外,SpCas9-NLS在体外切割实验中表现出色,能够快速、特异地切割目标DNA。 应用场景 细胞基因编辑:SpCas9-NLS与sgRNA结合后,可以高效地进入细胞核,实现基因组的定点编辑。 体外切割实验:可用于体外检测sgRNA的切割效率,筛选高效的gRNA序列。 基因敲除与敲入:通过非病毒载体转染,实现基因的敲除或插入。 高保真基因编辑:一些经过优化的SpCas9-NLS突变体(如Cas9 HF-NLS)能够进一步降低脱靶效应,提高编辑的精确性。
如果凝胶中预先加入 EB,电泳结束后紫外灯下观察时200 bp 以下条带亮度较弱,可通过凝胶后染方法
T4 RNA连接酶2截短型(T4 RNA Ligase 2, Truncated)是一种经过基因工程改造的酶,仅包含T4 RNA连接酶2的N端249个氨基酸残基。它能够特异性地将5'端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA的3'羟基末端。与全长的T4 RNA连接酶2不同,截短型酶不需要ATP来发挥活性,但需要预腺苷化的底物。 特点 特异性连接:只能利用5'端预腺苷化的单链DNA或RNA作为3'端接头,大大降低了连接反应的背景。 无需ATP:连接反应不依赖ATP,减少了非特异性连接产物的生成。 高纯度和稳定性:蛋白纯度超过99%,酶活性高,稳定性好。 应用 T4 RNA连接酶2截短型广泛应用于以下领域: 小RNA文库构建:在二代测序(NGS)中,用于miRNA文库构建中RNA的3'端接头连接。 cDNA文库构建:将单链腺苷化引物连接至小RNA上,用于cDNA克隆文库构建。 链特异性cDNA文库构建:将单链腺苷化引物连接至RNA上,用于链特异性cDNA文库构建。
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