在分子生物学实验中,DNA凝胶电泳是一种常用的技术,用于分离和分析DNA片段。
在分子生物学领域,DNA聚合酶是PCR技术的核心工具,而Pfu DNA Polymerase因其卓越的高保真性脱颖而出,成为精准基因扩增的首选酶。 Pfu DNA Polymerase是从嗜热菌Pyrococcus furiosus中分离纯化而来的一种耐热DNA聚合酶。与常见的Taq DNA聚合酶相比,Pfu酶最大的优势在于其具有强大的3'到5'外切酶活性,这种活性赋予了Pfu酶校正功能,使其在DNA合成过程中能够及时纠正错误配对的碱基,从而显著提高DNA扩增的准确性。研究表明,Pfu酶的保真度是Taq酶的约7倍,这意味着在扩增长片段DNA或需要高准确性的基因克隆实验中,Pfu酶能够更有效地避免突变的产生。 Pfu DNA Polymerase的耐热性也使其能够适应PCR反应中的高温变性步骤,保证在每个循环中都能稳定地合成DNA。这种耐热性与高保真性相结合,使得Pfu酶在长片段DNA扩增中表现出色。由于其校正功能减少了错误碱基的累积,Pfu酶能够更有效地合成较长的DNA片段,而不会因突变导致扩增失败。
在琼脂糖凝胶电泳中,GoldenView 与核酸结合后能产生强烈的荧光信号,其灵敏度与溴化乙锭相当
在生物实验中,核酸染色是检测DNA和RNA的重要步骤,但传统染料如溴化乙锭(EB)具有致癌性,对实验人员和环境存在潜在危害。4S Green Plus 无毒核酸染料作为一种新型的EB替代品,为科研人员提供了一种安全、高效且环保的选择。4S Green Plus 是一种无毒、非致癌的核酸染料,其灵敏度与EB相当,能够检测到低浓度的核酸分子。它在295 nm和490 nm处具有荧光激发最大值,与结合DNA的EB荧光激发点相近,可在紫外灯或蓝光LED下清晰观察DNA条带。这种染料不仅安全性高,还具有高特异性和荧光稳定性,不会与其他细胞成分结合,且在实验过程中荧光信号稳定。4S Green Plus 的使用方法灵活,既可用于凝胶前染色,也可用于凝胶后染色。在凝胶前染色时,将染料加入冷却至50-60℃的琼脂糖溶液中;在凝胶后染色时,每100 mL染色溶液中加入20-30 μL染料,染色30分钟后脱色即可。此外,4S Green Plus 适合用于琼脂糖凝胶中的双链DNA、单链DNA和RNA的检测。
dNTP Mix是一种由 dATP、dCTP、dGTP 和 dTTP 组成的等摩尔混合溶液
SYBR Green I是一种高灵敏度的荧光染料,广泛应用于核酸电泳和定量PCR等领域。其10000×浓缩液形式为实验操作提供了极大的便利,能够显著提高核酸检测的效率和灵敏度。产品特性SYBR Green I与双链DNA(dsDNA)结合后,荧光强度可增强1000倍,其检测灵敏度是传统溴化乙锭(EB)的25-100倍。这种染料在紫外光或可见光下均能发出明亮的绿色荧光,背景信号低,信噪比高,能够清晰地显示核酸条带。应用范围SYBR Green I适用于多种核酸分析方法,包括琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳。此外,它还常用于实时定量PCR(qPCR)中,通过检测荧光强度的变化来定量分析DNA或cDNA的扩增。使用方法 SYBR Green I可以采用预染或后染的方法进行核酸染色。预染时,将10000×的SYBR Green I稀释100倍,加入样品中室温孵育10分钟后再进行电泳。后染时,将电泳后的凝胶浸泡在稀释后的染色液中,室温振荡染色10-30分钟。在qPCR中,SYBR Green I通常以0.2×到1×的终浓度加入反应体系中。
Blood Direct PCR Master Mix (2×) 适用于多种PCR应用,常规PCR
T4 DNA连接酶是一种在分子生物学中不可或缺的工具酶,广泛应用于基因工程和DNA操作中。它最初从T4噬菌体感染的大肠杆菌中分离出来,能够催化双链DNA、RNA或DNA/RNA杂合链中相邻核苷酸的磷酸二酯键形成。 工作原理 T4 DNA连接酶的作用机制包括三个关键步骤: 酶-AMP复合物形成:T4 DNA连接酶首先与ATP结合,将ATP的腺苷酸部分转移到酶的赖氨酸残基上,形成酶-AMP中间体。 DNA末端腺苷化:酶-AMP复合物识别DNA末端的5'-磷酸和3'-羟基,将AMP转移到DNA的5'-磷酸末端。 磷酸二酯键形成:3'-羟基攻击5'-磷酸末端,形成新的磷酸二酯键,从而完成DNA片段的连接。 应用 T4 DNA连接酶在分子克隆中具有多种应用: 黏性末端连接:通过限制性内切酶产生的黏性末端,T4 DNA连接酶可以高效地将DNA片段与载体连接,确保目的片段以正确的方向插入。 平末端连接:虽然连接效率较低,但T4 DNA连接酶也可以用于平末端DNA片段的连接。 RNA修复与连接:它还能修复双链RNA或DNA/RNA杂合链中的单链缺口,用于RNA检测和修复。
Taq PCR Master Mix (2×) Without Dye 是一种即用型的PCR预混液
在荧光定量PCR(qPCR)实验中,探针法因其高特异性和高灵敏度而备受青睐,尤其适用于需要精确检测目标基因的实验场景。然而,某些qPCR仪器(如部分ABI系列)需要高浓度的ROX参考染料来校正孔间荧光信号的差异,以确保定量的准确性和重复性。为此,Probe qPCR Mix (2×, High ROX)应运而生,它为这些特定需求提供了完美的解决方案。 高浓度ROX的重要性 ROX参考染料在qPCR实验中扮演着关键角色,它能够校正由于仪器荧光检测系统的波动、反应体系的差异以及孔间位置的差异所导致的非特异性荧光信号。对于某些qPCR仪器,高浓度的ROX是实现精准定量的必要条件。Probe qPCR Mix (2×, High ROX)中的ROX浓度经过精确调整,能够满足这些仪器对高浓度ROX的需求,从而有效提高定量的准确性和重复性。 产品特点 优化的反应体系:Probe qPCR Mix (2×, High ROX)含有优化的反应缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq DNA聚合酶以及其他必要的成分。
它不仅提高了实验的准确性和可靠性,还为科研人员提供了便捷的操作体验。
GTBE电泳缓冲液(10×)是一种专为DNA电泳设计的高浓度缓冲液,广泛应用于分子生物学实验中。它由甘氨酸和TBE(Tris-Borate-EDTA)组成,特别适用于脉冲场凝胶电泳(PFGE)。产品特性成分:主要由甘氨酸、TBE缓冲液(Tris-Borate-EDTA)和防腐剂组成。缓冲能力:缓冲能力较弱,特别适合分离小于2000 bp的DNA片段。 即用型设计:10×浓缩液,使用时需用去离子水稀释10倍至1×后使用。稳定性高:室温保存,有效期长达12个月。使用方法稀释缓冲液:将10×GTBE缓冲液用去离子水稀释10倍,制备1×工作液。制备凝胶:使用1×GTBE缓冲液制备琼脂糖凝胶。电泳操作:将样品加入凝胶加样孔中,进行电泳。电泳条件根据实验需求调整。染色与观察:电泳结束后,使用合适的DNA染料(如EB或Goldview)染色,在紫外灯下观察DNA条带。保存与注意事项保存条件:室温保存,开封后尽快使用,有效期为12个月。个人防护:操作时需佩戴实验服和一次性手套,以确保安全。用途限制:仅供科研使用,不得用于临床诊断或其他非科研用途。
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